培养液按说明书讲是要避光的，但从4摄氏度冰箱拿出来一起照台，刚好温度升上去，而且紫外线不透塑料，所以就拿去照吧。胰酶也说要4摄氏度保存，但同样存在一个升温的问题，尤其是胰酶的消化温度，所以也拿去照台。

通用型4℃冰箱推荐：澳柯玛实验室通用4℃冰箱，出厂预设4摄氏度，误差正负0.1℃，具有控温报警系统，整层搁板设计。

细胞就不要拿去照台了，也不喷酒精，以免倒置显微镜下看不清楚，沾湿的瓶口也更容易沾上脏东西。照台前，先往超净台喷一遍酒精，放完物品可以再喷一次。照完台，关紫外灯，开白灯，开风机，ZUI低档风速即可，戴上手套，手套喷酒精，操作前，先点酒精灯，再用酒精纱布擦擦台面，擦完的干净台面上可以放瓶盖，瓶盖凹面不能向上，侧放，不行的话就将瓶盖盖在干净的台面上。开小培养瓶的瓶盖，可以手掌小鱼际固定、压住平放的培养瓶瓶身，拇指和食指拧开瓶盖，达到单手操作的效果，拧上的时候也一样。

滴管不用的时候夹在无名指和中指之间，保持水平，避免污染。开盖后的培养瓶，不要竖立，往培养瓶中加液体时拿着培养瓶也是斜放。滴管的液体尽量避免沾到瓶口，因为血清的存在所以*培养基会产生气泡，滴管不要排空就不会把滴管内的气泡带入培养瓶或沾在滴管口，滴管口不沾气泡则在出瓶口时不容易沾到瓶口。滴管出瓶口的时候，要快进快出，要悬着一个念头，念头悬着进而注意力更集中、动作更快。

低速离心机：细胞离心应选择较低的转速，避免对细胞的物理损伤，个人习惯用1000r/min，一般离心5分钟。差速离心技术的应用十分普遍，尤其是针对有生物活性的物质，如动植物病毒、各种亚细胞组分(细胞核、叶绿体、线粒体等)，以及核酸和蛋白质等生物大分子的分离、粗提和浓缩。

复苏：先让水浴锅的温度达到37摄氏度左右，从低温区取出冻存的细胞后马上投入水浴中。复苏的关键是快速解冻。将冻存的细胞吸到离心管中，加入一定量*培养液后离心，是为了去除冻存液中的DMSO。直接吸取1ml冻存液到25平方厘米的培养瓶中，再加*培养基到5ml，则DMSO的终浓度为2%，这个浓度的DMSO还是会在一定程度上抑制细胞生长。不经过离心去除DMSO，不是说一定不可以，只是后果自负。

换液：当培养液变黄时，说明细胞生长旺盛，一定要换液，快长满了就传代或冻存。当培养液较脏时，比如漂浮较多死细胞，一般出现在复苏或传代后的第二天、以及常规生长细胞的第二三天，也要及时换液。

洗细胞：当培养瓶中出现较多死细胞、细胞碎片或其他杂质时，就要清洗一下。但注意用吸管加入PBS或生理盐水时，要对着培养瓶侧壁，以免冲刷掉瓶底的部分细胞。加入PBS或生理盐水后，盖上盖子，在台面上摇晃几下，注意不要把液体溅起来或沾到培养瓶顶面。能用PBS洗较好，虽然PBS的主要成分是氯化钠，但具有pH缓冲作用，用无菌生理盐水洗细胞也可，优点是比较便宜。

消化：个人经验是先摸时间，一劳永逸，以后对于同一种细胞到时间了就赶紧加*培养基终止消化。一般消化2分钟就行了，在此基础上增减消化的时间。也有人建议在倒置显微镜下观察，等大部分贴壁细胞收缩后就停止消化，但个人认为这是多此一举，而且很难把握一个度。吹打细胞要有节奏，动作要熟练，吸的时候要在液面下吸，吹的时候要对着瓶底没液平的地方吹，吸的时候不要吸到气体、吹的时候不要吹入液体平面下，这样就基本不会产生气泡。

传代：常用1:2传代，这样才有足够的细胞密度。不离心再重悬细胞，虽然避免了离心和重悬对细胞的损伤，减少了几个步骤，减少污染，但吸掉胰酶的中和液后很容易丢失一部分细胞，甚至丢失大部分细胞，对于初学者不太适用。刚传代的细胞，若在倒置显微镜下观察到分布不均匀、有细胞团，就要及时晃匀。